Родился 18 августа 1959 года в городе Ленинграде.

В 1976 году окончил школу № 509 г. Ленинграда.

В 1981 году окончил Ленинградский институт инженеров железнодорожного транспорта. Работал мастером цеха в одном из депо Октябрьской железной дороги.

В 1983—1984 годах — заведующий орготделом Ленинского райкома ВЛКСМ, ответорганизатор Ленинградского обкома ВЛКСМ, заведующий сектором Ленинградского горкома ВЛКСМ.

В 1984—1990 годах служил офицером в армии, был сотрудником армейской печати. С января 1988 года — член Союза журналистов СССР.

В 1990—1993 годах был депутатом Ленинградского горсовета. На момент избрания депутатом был секретарём комитета ВЛКСМ батальона курсантов Ленинградского высшего училища железнодорожных войск и военных сообщений им. М. В. Фрунзе.

В 1990—1991 годах он был руководителем пресс-центра совета и Ленгорисполкома.

В 1991—1996 годах — председатель комитета по печати и СМИ мэрии Санкт-Петербурга (в этот же период комитет по внешним связям мэрии возглавлял Владимир Путин). После поражения мэра Санкт-Петербурга А. А. Собчака на выборах 1996 года переехал в Москву.

С 1996 года — заместитель председателя Государственного комитета Российской Федерации по печати Ивана Лаптева.

В 1998 году защитил в Санкт-Петербургском государственном университете диссертацию на соискание учёной степени кандидата психологических наук на тему «Психология влияния средств массовой информации на формирование политических установок личности».

В 1999 году — докторант МГИМО.

В ноябре 1999 года стал президентом Центра стратегических разработок, который обеспечивал избирательную кампанию президента В. В. Путина в 2000 году.

16 января 2002 года назначен представителем в Совете Федерации от Администрации Иркутской области, с января 2004 года — заместитель председателя Совета Федерации, курировал информационную политику и экономические вопросы.

28 мая 2009 года его кандидатура была представлена Президентом Российской Федерации Дмитрием Анатольевичем Медведевым на пост губернатора Иркутской области. 8 июня 2009 года кандидатура Мезенцева утверждена на сессии Законодательного собрания Иркутской области.

Председатель Правления Делового совета Шанхайской организации сотрудничества (4 июня 2009 года избран повторно).

Член Президиума Государственной комиссии по вопросам социально-экономического развития Дальнего Востока, Республики Бурятия, Иркутской области и Забайкальского края.

Член Правительственной комиссии по высоким технологиям и инновациям.

Член Комиссии при Президенте России по вопросам развития информационного общества.

Член Совета при Президенте России по развитию физической культуры и спорта, спорта высших достижений, подготовке к проведению XXII Олимпийских игр и XI Паралимпийских зимних игр 2014 в Сочи.

Заведующий кафедрой политической психологии Санкт-Петербургского государственного университета (с 2009 года по настоящий момент).

Пытался участвовать в выборах на пост президента России в 2012 году. 14 декабря 2011 Профсоюзный комитет Восточно-сибирской железной дороги РЖД выдвинул Дмитрия Фёдоровича Мезенцева кандидатом в Президенты России. Данное решение поддержал глава Российских железных дорог Владимир Якунин. ЦИК РФ отказал Мезенцеву в регистрации, так как после отбраковки части подписных листов у него оказалось недостаточно подписей.

18 мая 2012 года был отправлен в отставку с поста губернатора Иркутской области, с формулировкой «по собственному желанию». И. о. губернатора был назначен Сергей Ерощенко.

7 июня 2012 года главы государств-члены Шанхайской организации сотрудничества приняли решение о назначении Мезенцева генеральным секретарем этой организации. Он будет занимать эту должность с 1 января 2013 года по 31 декабря 2015 года.

С января 2016 года приступил к осуществлению полномочий члена Федерального собрания Российской Федерации от исполнительной власти Сахалинской области.